COMUNICACIÓN POSTER

AUTORES

Cambray Carner, Serafi; Torreguitart , Nuria; Mauri , Gerard; Suárez , Idalmis; Purroy Garcia, Francisco

CENTROS

Servicio de Neurología. Hospital Universitari Arnau de Vilanova de Lleida

OBJETIVOS

Los modelos animales actuales parecen no simular adecuadamente los fenómenos de isquemia transitoria en humanos. Por ello, proponemos establecer un modelo fiable y reproducible de AIT en ratón y optimizar los métodos de extracción de mRNA de sangre para arrays con el objetivo de mejorar la búsqueda de nuevos biomarcadores y ser plataforma para ensayar fármacos

MATERIAL Y MÉTODOS

En ratón anestesiado se ocluye la Arteria Cerebral Media distal mediante compresión, la caída del flujo se monitoriza en zonas distales de ACM mediante láser Doppler. Las constantes se monitorizan con un pulsioxímetro, su temperatura se mantiene mediante sonda rectal y manta homeotérmica. Posteriormente los ratones se estabulan y a las 24, 48 y 72h se perfunden para realizar un analisis histológico que permita establecer los tiempos de oclusión para recrear un AIT o un infarto cerebral (IC). Para la extracción de mRNA usamos fracciones de células nucleadas congeladas y sangre recién obtenida, además de Trizol y kits comerciales.

RESULTADOS

El análisis de los córtex post-oclusión muestra que la oclusión durante 15 minutos simula un AIT y 25 un IC. La mejor manera de extraer mRA se obtiene tras aislar en sangre fresca la fracción nucleada y lisar los eritrocitos combinado con el kit RNeasy.

CONCLUSIONES

Es factible crear un modelo de ratón que simule tanto AIT como IC para ser usado en diferentes estudios. Para obtener mRNA de pureza y integridad suficiente para ser usado en micro arrays, es necesaria una lisis de los erotrocitos y procesar la muestra inmediatamente después de ser obtenida.