COMUNICACIÓN ORAL | 30 noviembre 2020, lunes | Hora: 15:00
AUTORES
Valle Tamayo, Natalia 1; Cervera Carles, Laura 1; Muñoz Llahuna, Laia 1; Kapravelou , Garyfallia 2; Cofan , Montserrat 2; Chiva , Gemma 2; Jiménez , Amanda 2; Ortega , Emilio 2; Belbin , Olivia 1; Alcolea , Daniel 1; Carmona Iragui, Maria 1; LLeó Bisa, Alberto 1; Clarimón Echavarria, Jordi 1; Fortea Ormaechea, Juan 1; Iulita , M. Florencia 1
CENTROS
1. Servicio de Neurología. Hospital de la Santa Creu i Sant Pau; 2. Servicio: Neuroendocrinología. Institut d’Investigacions Biomèdiques August Pi Sunyer (IDIBAPS)
OBJETIVOS
El análisis de vesículas extracelulares (VEs) es una herramienta innovadora de gran potencial para el diagnóstico y búsqueda de marcadores cerebrales en biofluidos. Además de proteger su contenido de la degradación por enzimas, la ventaja de las VEs radica en que se pueden utilizar para la búsqueda de marcadores de células específicas, en base a sus proteínas de superficie. El objetivo de este estudio es optimizar un método de enriquecimiento de VEs de origen neuronal, que pueda utilizarse en la investigación clínica para mejorar el diagnóstico de enfermedades neurológicas.
MATERIAL Y MÉTODOS
Plasma de 3 sujetos sanos, 500 µL por condición. El enriquecimiento de VEs se llevó a cabo con ExoQuick seguido de inmunoprecipitación (IP) con anticuerpo anti-L1CAM por 1 h a 4ºC (condición 1 y 2) o 16 h a 4ºC (condición 3) e incubación con estreptavidina por 4 h a 4ºC (1 y 3) o 16 h a 4ºC (2). La eficiencia de la IP fue verificada mediante Western blot (L1CAM) y análisis del marcador neuronal NfL mediante Simoa.
RESULTADOS
La fracción del pellet post-IP mostró un enriquecimiento en la señal de L1CAM y NfL con respecto al sobrenadante en las tres condiciones evaluadas. Se observaron señales de L1CAM y NfL más elevadas cuando el enriquecimiento se realizó con incubaciones de 16 h para L1CAM y estreptavidina.
CONCLUSIONES
Las señales enriquecidas de L1CAM y NfL indican que se ha conseguido optimizar un método de concentración de VEs neuronales en plasma, cuyo contenido puede ser analizado para la búsqueda de biomarcadores de enfermedades neurológicas.
