COMUNICACIÓN ORAL | 20 noviembre 2014, jueves | Hora: 15:30
AUTORES
García Planells, Javier 1; Ruiz Lafora, Carlos 2; Valero García, Jennifer 2; Bermejo Villodre, Merche 2; Rausell Sánchez, Laura 2; Molero Rozalem, Merche 2; Lázaro , Marian 2; Pérez Alonso, Manuel 3; Smeyers Durá, Patricia 4; García Hoyos, Maria 2
CENTROS
1. Servicio de Genética. Instituto de Medicina Genómica; 2. Servicio de Genética. Instituto de Medicina Genómica (IMEGEN); 3. Departamento de Genética. Universidad de Valencia; 4. Servicio de Neurología. Hospital Universitari i Politècnic La Fe
OBJETIVOS
Las encefalopatías epilépticas infantiles (EEI) son un grupo amplio y heterogéneo de trastornos neurológicos de etiología muy variada y con un importante componente genético. El objetivo de este trabajo es el desarrollo y validación de un procedimiento coste-eficaz que permita el análisis simultáneo de un amplio número de genes mediante el uso de tecnologías de secuenciación masiva.
MATERIAL Y MÉTODOS
Las regiones codificantes de los 22 genes seleccionados se han capturado mediante amplificación específica por PCR con el objetivo de obtener la máxima sensibilidad diagnóstica, evitando los problemas típicos de otros sistemas de captura. La secuenciación masiva se ha realizado en un MiSeq Personal Sequencer (Illumina). La secuenciación Sanger, técnica gold standard, se ha realizado en un Applied Biosystems 3730xl DNA Analyzer siguiendo protocolos convencionales.
RESULTADOS
Se han comparado más 900 variaciones conocidas en 96 genes diferentes con ambas tecnologías de secuenciación, obteniéndose una sensibilidad y especificidad del 100%. El procedimiento desarrollado detecta con gran precisión mutaciones puntuales y pequeñas inserciones y deleciones en todas las regiones codificantes y regiones intrónicas adyacentes (30bp) de los 22 genes seleccionados. Asimismo se han identificado todas las mutaciones presentes en las muestras control.
CONCLUSIONES
El procedimiento desarrollado, basado en secuenciación masiva, facilita el análisis de un amplio grupo de genes asociados a EEIs de una manera rápida y económica, incrementando significativamente el rendimiento diagnóstico. La identificación de las causas genéticas permitirá establecer su etiología, reduciendo la necesidad de otras pruebas intensivas, obtener un diagnóstico precoz, proporcionar asesoramiento genético y, en algunos casos, incluso, optimizar la terapia antiepiléptica.
