COMUNICACIÓN POSTER
AUTORES
Meca Lallana, Virginia 1; Serra Lopez-Matencio, Jose Maria 2; Sanchez , Pedro 3; del Río Muñoz, Beatriz 4; null, Alberto 5; Vivancos Mora, Jose 6; Muñoz Calleja, Cecilia 7
CENTROS
1. Unidad de EM. Servicio de Neurología. Hospital Universitario de la Princesa. Fundación de Investigación Princesa; 2. Servicio de Farmacia. Hospital Universitario de la Princesa; 3. Unidad de Enfermedades Desmielinizantes. Servicio de Neurología. Fundación de Investigación Princesa. Hospital Universitario de la Princesa; 4. Unidad de Enfermedades Desmielinizantes. Servicio de Neurología. Instituto de Investigación Princesa. Hospital Universitario de la Princesa; 5. Unidad de Terapias Biológicas. Hospital Universitario de la Princesa; 6. Servicio de Neurología. Hospital Universitario de la Princesa; 7. Instituto de Investigación Princesa. Servicio de Inmunología. Hospital Universitario de la Princesa
OBJETIVOS
Natalizumab es un anticuerpo monoclonal que actúa uniéndose a la cadena α4 de la integrina α4β1(VLA-4) y de la integrina α4β7, bloqueando la migración de los linfocitos a través de la barrera hematoencefálica, en el tratamiento de la Esclerosis Múltiple Remitente Recurrente (EMRR).Poner a punto la técnica para medir los niveles de natalizumab en el suero de los pacientes por citometría de flujo.
MATERIAL Y MÉTODOS
Estudio observacional, prospectivo con sueros de pacientes con EMRR tratados con natalizumab. Las muestras se obtuvieron previo al fármaco y post2horas. Se utilizó una línea T de células Jurkat positiva para VLA-4. El natalizumab(Tysabri, Biogen Idec and Elan Pharmaceuticals)suministrado a una concentración de 20 mg/ml. Una alícuota fue biotinilada acorde a los métodos estándares.fueron utilizados anticuerpos antiCD3 y antiCD45 para confirmar el linaje de las células Jurkat.
RESULTADOS
Hemos diseñado un ensayo competitivo por citometría de flujo:dosis crecientes de natalizumab sin marcar son incubadas con células t Jurkat VLA4+30 minutos a4ºC. Seguidamente las células son lavadas para eliminar el exceso de natalizumab sin marcar,seguido de una segunda incubación, esta vez añadiendo en exceso natalizumab biotinilado.Finalmente las células son marcadas fluorescentemente en una tercera incubación.En el citómetro de flujo se analiza la intensidad media de fluorescencia (IMF) que emiten las moléculas de VLA-4.Natalizumab sin marcar competirá con el natalizumab marcado con biotina, de modo que conforme la concentración de anticuerpo marcado se incremente, la IMF de las VLA4 disminuirá.
CONCLUSIONES
Hemos diseñado un método alternativo para la medición de los niveles de natalizumab en suero, alternativo al ELISA utilizado tradicionalmente.
